Reactivos comunes en cultivo celular
Cuando las células o tejidos animales abandonan el cuerpo para ser cultivados fuera del cuerpo, es necesario proporcionarles varios nutrientes necesarios para el crecimiento y varios reactivos necesarios para un mejor crecimiento celular in vitro. En este número, presentaré brevemente algunos componentes de reactivos utilizados en el proceso de cultivo celular y sus funciones.
1. Composición del medio de cultivo celular
(1). medio de cultivo básico
Los medios basales comunes incluyen principalmente MEM, DMEM y RPMI, que principalmente proporcionan sistemas tampón que incluyen glucosa, aminoácidos, agua, oligoelementos y bicarbonato de sodio.
● Glutamina
Es un aminoácido esencial necesario para el crecimiento celular y participa en la síntesis de proteínas y el metabolismo de los ácidos nucleicos.
● Indicador de rojo fenol
Un indicador ácido-base de uso común, muestra amarillo cuando es ácido, rojo cuando es neutral y púrpura cuando es alcalino. El rojo de fenol se utiliza como indicador del valor de pH en el medio.
● Sistema amortiguador de carbonato/PH
Un sistema tampón de pH fisiológico. Debido a la producción de ácido durante el metabolismo celular, el HCO3- del medio se consumirá gradualmente, por lo que es necesario reponer el CO2 a tiempo para mantener el pH dentro de un cierto rango.
(2).suero animal
Agregue 2%-20% de suero al medio basal para formar un medio completo. El suero no solo puede proporcionar a las células los nutrientes básicos necesarios para el crecimiento, sino que también contiene componentes importantes que intervienen en el metabolismo celular, como factores de crecimiento, hormonas, oligoelementos e iones.
(3). antibióticos
Para evitar que las células se contaminen durante el proceso de cultivo, se suele añadir al medio completo una mezcla de penicilina-estreptomicina, es decir, un doble anticuerpo. La penicilina es principalmente eficaz contra las bacterias grampositivas y la estreptomicina es eficaz contra muchas bacterias gramnegativas. .
2. Tripsina-EDTA
La tripsina puede hidrolizar la proteína entre las células y luego separar las células. El EDTA es un agente quelante químico de baja toxicidad y tiene un efecto discreto sobre las células adherentes. Cuando los dos se usan en combinación, la eficiencia de las celdas de dispersión es mayor. Este paso se llama células digestivas. Para diferentes células, existen diferentes requisitos de temperatura, tiempo y concentración de tripsina cuando se usa. Si la digestión es insuficiente, las células no se pueden digerir y una digestión excesiva causará daño celular. Dado que el suero en el medio puede reducir la actividad de la tripsina, generalmente se usa el medio completo para terminar la digestión celular.
3. Tampón PBS
PBS es una solución salina tamponada con fosfato con equilibrio salino y efecto tampón de pH ajustable. Generalmente se utiliza para lavar las células y mantener la presión osmótica celular.
4. Dimetilsulfóxido (DMSO)
Un importante protector celular penetrante y un componente importante en el fluido de crioconservación celular. Durante el proceso de crioconservación de las células, el DMSO puede penetrar rápidamente en la membrana celular y entrar en la célula, reducir el punto de congelación, retrasar el proceso de congelación, aumentar la concentración de iones en la célula, reducir la formación de cristales de hielo en la célula y reducir la daño.
5. Inhibidores de micoplasma
La contaminación por micoplasma es una fuente común de contaminación en el proceso de cultivo celular. Sin embargo, los inhibidores de micoplasma se pueden usar para eliminar el micoplasma en el fluido celular en la etapa inicial de contaminación, de modo que el experimento pueda continuar.
6. Tinte azul tripán
Un reactivo de tinción biológica comúnmente utilizado para detectar la integridad de la membrana celular. Debido a la pérdida de la integridad de la membrana celular y al aumento de la permeabilidad, las células muertas pueden teñirse de azul con el azul de tripano, mientras que las células vivas no se teñirán porque tienen membranas celulares intactas que pueden impedir que el azul de tripano entre en la célula. Las células vivas y muertas se pueden distinguir por el color de la célula bajo un microscopio, lo cual es conveniente para el recuento de células vivas.
