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¿Cómo elegir un instrumento fluorescente cuantitativo de PCR?

Conocimientos técnicos 2020-07-14 15:31:02
Parámetros clave y características importantes del instrumento de PCR cuantitativa de fluorescencia Al comprar un instrumento de PCR cuantitativa de fluorescencia, deben tenerse en cuenta varios parámetros clave:

1. El flujo de detección del instrumento

Lo primero a considerar es con qué frecuencia el laboratorio necesita usar un instrumento de PCR cuantitativa. David Ginzinger, jefe del equipo de análisis del genoma de la Universidad de California en el Centro de Cáncer de San Francisco, ha probado la mayoría de las máquinas de PCR cuantitativa en el mercado. Dijo que si no se usa a gran escala, por ejemplo, se usa principalmente para probar genes conocidos, entonces no necesita productos caros de alta gama. Pero para aquellos laboratorios que necesitan encontrar nuevos objetivos farmacológicos y marcadores de enfermedades, necesitan instrumentos que puedan contener placas de 384 pocillos y funcionar más rápido. Sin embargo, solo un instrumento de alto rendimiento no es lo suficientemente rápido y encontrará que la preparación de la muestra se convierte en un cuello de botella para limitar la velocidad. Por lo tanto, los laboratorios de alto rendimiento a menudo requieren más instrumentos automatizados, siempre que se presione el botón, el instrumento procesará automáticamente las muestras, purificará los ácidos nucleicos y preparará las plantillas de PCR.

2. La capacidad de amplificación múltiple

La amplificación múltiple se está calentando. El equipo de PCR cuantitativa en tiempo real no es inmune. El instrumento de PCR cuantitativa de alta gama tiene múltiples canales de detección, por lo que el instrumento puede detectar el proceso de amplificación de múltiples plantillas en el mismo tanque de muestra. El nuevo LightCycler2.0 tiene 6 canales de detección, 3 más que el original. SmartCyclerⅡ tiene 4 canales de detección. Stratagene, que es famoso por sus productos de biblioteca, también tiene un instrumento de PCR cuantitativa Mx3000P con menos de la mitad del precio de Roche y una buena reputación, es decir, 4 canales de detección. Sin embargo, la amplificación múltiple no es adecuada para todos porque complica el experimento.

3. Software

Cuando esté listo para elegir un instrumento de PCR cuantitativa, debe verificar el software adjunto. ¿Es conveniente de usar? ¿Puede llevar a cabo el análisis que necesita? Hay varios formatos de salida. Sin embargo, debe prestar atención a si el software que es demasiado fácil de usar es relativamente simple en su función y no puede realizar cálculos complejos. El software anterior requiere que realice un análisis más detallado. El nuevo software ya puede manejar todo. Además de las funciones básicas, algunos programas también pueden tener más funciones, como diseño de cebador y sonda, diseño de análisis múltiple, corrección de fondo, normalización de datos, etc. Willian Demyan, jefe del departamento de aplicación y servicio técnico del Departamento de Ciencias Aplicadas de Roche, enfatizó que la PCR cuantitativa es un proceso de amplificación geométrica. Al principio, hay una diferencia de copia y los resultados varían según el orden geométrico.

4. Flexibilidad

El equipo de laboratorio ocupado a gran escala es ciertamente envidiable, y los laboratorios convencionales también pueden tener opciones maravillosas. Los proveedores actuales tienen muchos expertos técnicos, no solo para comprender sus necesidades actuales, sino también muy cuidadoso para que usted considere posibles cambios futuros en la demanda, como proporcionar una variedad de accesorios y módulos actualizables. MyCycler de BioRad puede seleccionar módulos y actualizar a cuantificación en tiempo real. El instrumento de PCR cuantitativa de ABI tiene una variedad de diferentes tanques de muestra, que pueden cambiar los tanques de 96 pozos en tanques dobles de 384 pozos para cumplir con algunos requisitos de alto rendimiento. Para los laboratorios que acaban de comenzar qPCR en pequeñas cantidades, el instrumento de PCR cuantitativa SmartCycler II es una buena opción. Un módulo básico tiene 16 tanques de muestra de control de temperatura independientes, y se pueden realizar 16 experimentos completamente independientes simultáneamente o antes y después. "Acceso"; cuando el laboratorio necesita un experimento a mayor escala, se puede actualizar de manera muy económica, de 1 a 6 módulos básicos, que son 96 pozos de muestra. Aunque las placas de 96 pocillos no se pueden usar, cuando un estudiante comienza una pequeña cantidad de experimentos, otros también pueden conectarse en cualquier momento para comenzar sus propios experimentos independientes, y no interfieren entre sí, lo que aumenta la flexibilidad. Es una opción muy flexible para laboratorios que solo tienen una pequeña cantidad de experimentos y tienen un presupuesto ajustado al principio.

5. Incertidumbre

Aunque el software puede corregirse parcialmente, es mejor comprar un instrumento con errores menos sistemáticos sin requerir tantas correcciones de cálculo que por cálculo. Cinzinger cree que se debe prestar especial atención a las diferencias entre los pozos de muestra del instrumento. Además de las diferencias de temperatura bien conocidas entre los orificios de muestra, también hay pequeñas diferencias en la distancia del camino óptico entre el orificio de muestra y la sonda de detección, la ligera diferencia en la longitud de la fibra responsable de enviar y recibir y transmitir señales, la pequeña diferencia en la distancia y el ángulo entre la lente y el orificio de muestra, e incluso El efecto de la celda de muestra en la transmisión de señal. Cinzinger ha realizado la misma prueba en la mayoría de los instrumentos de PCR cuantitativa disponibles comercialmente, amplifica las mismas muestras y reactivos en tiempo real en cada pocillo del instrumento. Desafortunadamente, muchas veces, habrá diferentes resultados entre diferentes pozos de muestra.

6. Selección de kits

Aunque el personal de ventas se jactará de excelentes kits de control de calidad y las soluciones obtendrán resultados individuales, pero la compra de kits listos para usar no es una solución a las diferencias. Experimentos de evaluación serios y experimentos analíticos son las soluciones.

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