I. Funcionamiento: Creación de un ambiente anaeróbico
1. Ajuste de la presión de salida de los cilindros de nitrógeno y gas combinado: Ajuste la válvula reductora de presión a aproximadamente 0,1 MPa.
2. Encienda el interruptor de alimentación y el controlador de temperatura, ajustando la temperatura deseada. La temperatura dentro de la cámara de operación de la incubadora se puede seleccionar y controlar libremente.
3. Coloque los accesorios y equipos necesarios según los requisitos de uso e introduzca dos bolsas de plástico no tóxicas en la cámara de operación.
4. Coloque 1000 g de gránulos de paladio secos (sellados) y 500 g de desecante, junto con un indicador anaeróbico (sellado), en la cámara de operaciones.
5. Cierre herméticamente las puertas interior y exterior de la cámara de muestreo y realice una comprobación de vacío.
6. Reposición secundaria de nitrógeno en la cámara de operaciones:
(1) Introduzca un tubo de goma en la entrada de aire de la cámara de operaciones y el otro extremo en una bolsa de plástico.
(2) Conecte la entrada de nitrógeno, abra la válvula de control de nitrógeno, llene ambas bolsas de plástico con nitrógeno y cierre bien las aberturas.
(3) Coloque guantes de látex en el anillo de la brida del panel de observación y átelos firmemente.
(4) Libere gradualmente el nitrógeno de las bolsas de plástico en la cámara de operaciones hasta que se haya liberado todo el nitrógeno.
7. Reposición secundaria de nitrógeno en la cámara de operaciones: Repita el proceso de llenado de nitrógeno, prestando atención a la apertura y cierre de la válvula de escape en todo momento. 8. Reemplazo terciario de la mezcla de gases en la cámara de operaciones:
(Proporción de la mezcla de gases: N2 90%; H2 5%; CO2 5%).
(1) Cambie el flujo de gases, abra la válvula de entrada de la mezcla de gases y abra y cierre la válvula de escape en cualquier momento durante el llenado.
(2) Una vez que la mezcla de gases llene las bolsas de plástico, cierre la válvula de paso directo de la mezcla de gases (válvula de tres vías).
(3) Libere gradualmente la mezcla de gases de la bolsa de plástico a la cámara de operaciones.
(4) Después de tres intercambios de aire, el contenido de oxígeno en la cámara de operaciones se reduce a cantidades mínimas.
9. Encienda el depurador de oxígeno de gránulos de paladio en la cámara de operaciones y conecte la fuente de alimentación al dispositivo de desoxigenación catalítica de oxígeno. Después de una hora, observe el cambio de color de la tira indicadora anaeróbica. Un cambio de color indica que la cámara de operaciones ha alcanzado un ambiente anaeróbico.
10. Encienda la lámpara de esterilización ultravioleta para esterilizar la cámara. El usuario determinará el tiempo de esterilización.
II. Colocación y cultivo de cepas bacterianas
1. Verifique y cierre la puerta de la cámara de muestreo.
2. Abra la puerta exterior de la cámara de muestreo, coloque la cepa bacteriana en su interior y, a continuación, cierre la puerta exterior.
3. Realice tres ciclos de purga y reemplazo de nitrógeno en la cámara de muestreo: primero, evacúe hasta alcanzar un nivel de vacío de 500 mmHg (66 kPa) o superior; luego, abra manualmente la válvula de nitrógeno para que el indicador vuelva a cero antes de continuar con la siguiente operación.
4. Si se selecciona un nivel de vacío inferior, deberá aumentar el número de ciclos de reemplazo. 5. Tras abrir y cerrar las puertas de la cámara de muestreo, aplique un vacío bajo de 100 mmHg (13 kPa) para su inspección y control.
6. Condiciones para el uso continuo a largo plazo de la incubadora anaeróbica:
(1) Observe diariamente el indicador de anaerobiosis en el quirófano. Si es normal, puede continuar utilizándose. Si es anormal, debe renovarse el aire.
(2) Introduzca continuamente una pequeña cantidad de gas mezclado para asegurar que el hidrógeno añadido se combine con trazas de oxígeno para la absorción catalítica, manteniendo así un estado anaeróbico. El caudal del gas mezclado debe ser de aproximadamente 10 ml por minuto.
(3) Reemplace el desecante cada 3 días de incubación continua.
7. Aplicación del esterilizador de varillas de inoculación:
(1) Utilice un filamento calefactor de níquel-cromo para cortocircuitar y calentar la varilla de inoculación hasta que esté al rojo vivo para su esterilización.
(2) Coloque la cera de fusión directamente sobre la varilla de inoculación y gire la abertura del tubo de ensayo para fundirla.