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Verificación del efecto de esterilización del autoclave.

Conocimientos técnicos 2019-04-04 10:01:00
El esterilizador de vapor a alta presión esteriliza los artículos para lograr los requisitos de esterilidad, que es la garantía básica para los experimentos microbianos. La calificación de la esterilización en autoclave es el primer paso más fundamental y crítico para el éxito del experimento. Excepto por una pequeña cantidad de medio, que solo necesita ser calentado y disuelto, y no se requiere autoclave, la mayoría del medio se esteriliza en autoclave a 121 ° C durante 15-30 minutos. En particular, la esterilización del medio de prueba estéril no es exhaustiva y está directamente relacionada con los resultados de la prueba de esterilidad en la muestra. Por lo tanto, el efecto de esterilización del autoclave debe ser verificado. Con este fin, proporcionamos un método simple y viable para verificar la efectividad de la esterilización.

1. Material de prueba

(1) Papel Bacillus stearothermophilus (también está disponible un conjunto de tubos de ensayo vendidos por 3M Company). Bacillus stearothermophilus.

ATCC7053 es una bacteria indicadora biológica comúnmente utilizada en este método, que contiene una UFC / tableta de 5 células.

(2) Tarjeta de indicador químico de esterilización por vapor a presión a 121 ° C (también hay disponible cinta indicadora de esterilización común).

(3) El medio acuoso púrpura de bromocresol se autoclavó a 116 ° C durante 20 minutos y luego se usó (como el tubo de ensayo vendido por 3M Company, este medio no puede usarse).

(4) Termómetro residual de O-150 ° C (calibración requerida por la oficina de metrología).

2. Método y resultado

El papel de Bacillus stearothermophilus (en lo sucesivo, el comprimido bacteriano) se colocó en un tubo de ensayo sellado con un fórceps estéril. La tarjeta del indicador químico y el termómetro de punto se colocan en un tubo de ensayo abierto. Prepare 5-10 partes de cada uno de los dos tubos anteriores. Colóquelos en el puerto de vapor del autoclave, el puerto de escape inferior y la salida de agua inferior o en el centro de la parte superior, inferior, izquierda y derecha. Si el esterilizador está en el segundo piso, debe colocar 10 lugares.

El termómetro restante se puede usar para la prueba de verificación después de que se haya estandarizado. Antes de la prueba, la columna de mercurio del termómetro debe romperse a menos de 40 ° C. La diferencia de temperatura del termómetro después de cada monitoreo debe estar entre 1 ° C, lo que indica que la distribución de temperatura dentro del esterilizador es uniforme.

La placa esterilizada debe cultivarse a 56-60 ° C durante 24-48 horas en condiciones asépticas estériles en medio de agua de purina de bromocresol esterilizada para observar el cambio de color. Si el medio se vuelve amarillo, el B. stearothermophilus en la tableta no está completamente inactivado, y las bacterias aún pueden crecer en el medio, y la glucosa se descompone para producir ácido a amarillo. Si el color del medio no cambia, sigue siendo púrpura, lo que indica que las esporas se han desactivado. Al mismo tiempo, el papel no esterilizado se colocó en el medio como control positivo y el medio en blanco sin papel se usó como control negativo.

El color del indicador en la tarjeta del indicador químico cambia de amarillo claro a negro durante el autoclave. A medida que el color cambia en profundidad y en comparación con el color de control, se puede juzgar si el efecto de esterilización cumple con los requisitos. La tarjeta de indicador químico debe almacenarse en un lugar seco. Cambiará de color cuando se exponga a la humedad, lo que afectará la observación del efecto de esterilización.

La esterilización con vapor a alta presión debe permitir que el vapor entre al esterilizador sin problemas, haga contacto con los artículos esterilizados y descargue el aire frío original para lograr el efecto de esterilización. La distribución de calor sin carga y la verificación de penetración térmica a plena carga deben realizarse (no más de 2/3 del volumen total a plena carga). Las dos verificaciones se repitieron tres veces para un total de seis veces.

Cinco puntos y seis pruebas demostraron que la temperatura estaba a 121 ° C, la tarjeta de indicador químico se volvió negra, el grado fue consistente con el color de control, el medio no cambió de color, lo que indica que se calificó el efecto de esterilización con vapor a alta presión.

Los autoclaves son instrumentos poderosos, pero las inspecciones sólidas son solo un examen de los parámetros físicos del instrumento. Por lo tanto, el esterilizador que ha sido sometido a una fuerte inspección también debe verificar el efecto de esterilización. Algunas unidades a menudo pasan por alto este importante problema. En los esterilizadores portátiles domésticos, el indicador del instrumento a menudo alcanza la temperatura requerida, pero la temperatura real del artículo esterilizado no cumple con los requisitos. El plomo a artículos esterilizados no es exhaustivo, lo que afecta los resultados del experimento. El medio no se esteriliza completamente, afectando el uso del medio y juzgando los resultados. Por lo tanto, la verificación del efecto aséptico del autoclave es un problema que debe tomarse en serio.

Cuando use un esterilizador de vapor a alta presión, primero tenga cuidado de eliminar el aire frío del esterilizador mientras abre el vapor. El orificio de ventilación debe estar cerrado antes de que se haya eliminado todo el aire frío de la unidad.

Si queda algo de aire en el esterilizador, el manómetro ha alcanzado un cierto valor de presión, pero la temperatura dentro del dispositivo no ha alcanzado el grado correspondiente. Cuanto más aire queda, mayor es la diferencia entre los dos, la temperatura dentro del dispositivo es insuficiente y la esterilización no está completa. (Muchas personas tendrán burbujas en el catéter pequeño cuando se esterilicen en el medio de fermentación. También es posible tratar de descargar más aire frío del esterilizador. Tiene un efecto milagroso).

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