Figura 1 Diagrama esquemático del polipéptido en fase sólida
En 1963, Merrifield propuso un método de síntesis de péptidos en fase sólida, que abrió un amplio espacio para la investigación de péptidos y promovió en gran medida el desarrollo de la biología molecular y otros campos. Por esta razón, Merrifield recibió el Premio Nobel de Química en 1984.
Desde la década de 1990, con la maduración gradual de la tecnología de síntesis de polipéptidos, se han desarrollado y aplicado ampliamente más y más polipéptidos activos en los campos de la medicina, los alimentos, los cosméticos, la agricultura, la ganadería, etc. El método de síntesis de polipéptidos en fase sólida también se ha utilizado ampliamente. En este documento, la síntesis en fase sólida y la escisión de péptidos se presentan de acuerdo con el reactor de síntesis de péptidos en fase sólida.
Figura 2 Aplicación de campo del reactor completo de síntesis de polipéptidos en fase sólida
I. Agrietamiento de resina
i. Alimento
Agregar resina en una síntesis de fase sólida, agregar DCM para hinchar, drenar, agregar DMF para lavar, después del lavado, drenar para esperar.
ii. Condensación
Disolver el aminoácido en un cierto volumen de DMF, agregar un agente de condensación para la activación, colocarlo en un sintetizador de fase sólida, complementar la DMF a la concentración de reacción y agitar para la reacción.
iii. Eliminación del grupo protector El grado de reacción se detectó con reactivo de Kaiser. Una vez completada la reacción, se bombeó el disolvente, seguido de lavado con DMF. Se añadió solución de PIP/DMF para eliminar el grupo protector. El grado de reacción se detectó con reactivo de Kaiser. Una vez completada la reacción, se bombeó el disolvente, seguido de un lavado con DMF, en el que se añadió el siguiente aminoácido.
iv.Ciclo de condensación
Conectando secuencialmente los aminoácidos de acuerdo con la secuencia de la resina, realizando la operación del ciclo de condensación de acuerdo con los pasos de "desprotección-lavado-activación de aminoácidos-alimentación de condensación-lavado" y completando la condensación de los n aminoácidos restantes de acuerdo con la secuencia de aminoácidos .
i. Descarga
Después de la síntesis, la resina se lavó en cruz con IPA y DCM para completar la contracción de la resina y descargarla a la bandeja de acero inoxidable.
ii. Secado de resina
Secado de la resina en un horno de secado al vacío a temperatura ambiente, pesado después del secado y cálculo del rendimiento.
iii. Valorización de residuos orgánicos líquidos, tratamiento centralizado.
IV. Claro
El operador deberá despejar el sitio a tiempo después de la operación.
I. Agrietamiento de resina
i. preparación líquida
Prepare esa solución de lisis de acuerdo con la proporción de componentes de la solución de lisis y coloque la solución de lisis en un congelador para almacenamiento en frío por adelantado.
ii. Alimento
Adición de resina peptídica en un hervidor de reacción, adición de líquido de craqueo preenfriado y agitación para la reacción.
iii. Descarga
Descargar esa solución de reacción después del craqueo, filtrar para eliminar la resina y lavar con TFA.
IV. Concentración
Transfiera ese líquido craqueado a un evaporador rotatorio para concentrarlo en un pequeño volumen a temperatura ambiente.
v. Precipitación
La solución de reacción concentrada se vierte en metil terc-butil éter preenfriado (abreviado como éter) y se agita para precipitar una gran cantidad de sólidos.
vi. centrifugación
El líquido turbio se centrifuga y se lava con éter preenfriado.
i. Secado de péptido crudo
El péptido crudo purificado se transfirió a un horno de secado al vacío para secar a temperatura ambiente.
ii. Valorización de residuos orgánicos líquidos, tratamiento centralizado.
iii. Claro
El operador deberá despejar el sitio a tiempo después de la operación.
Figura 3 Conjunto completo de caldera de escisión de polipéptidos en fase sólida
En el proceso de producción real, el péptido bruto craqueado también debe someterse a procesos tales como purificación, concentración, filtración y liofilización, que no se describirán en detalle en este documento.
En la actualidad, el proceso para la síntesis de cadenas peptídicas más cortas está relativamente maduro, mientras que para las sustancias proteicas con mayor masa molecular y cadenas peptídicas más largas, la tecnología de síntesis en fase sólida tiene ciertas limitaciones y, mientras tanto, existen problemas como el alto costo y acompañada de reacciones secundarias. Por lo tanto, basándose en la síntesis de péptidos en fase sólida, todavía es necesario encontrar nuevas formas.
